| 四．讨 论
GIC可使离体肠粘膜细胞在培养液中重新连接组合成粘膜组织
现在一般均采用Trowell法进行体外小肠粘膜组织的器官型培养 ，此法从人体或动物经口腔取材，取材部位为十二指肠远端和空肠近端，将取出的粘膜（不可能是纯粹的粘膜组织，应该还包括粘膜下层、肌层等等，这与我们的做法一致），将粘膜放在金属网格上，然后粘膜连同网格一起置于多孔培养板中央的孔，其它孔中置入无菌生理盐水浸泡过的无菌纱布以便保持湿度，盖好，置入一个密闭容器中，通95%的氧气和5%的 ，37 培养箱中培养。这是目前通用的方法。但此法有明显的缺点，即方法较为繁琐，取材量有限，一般每次不能多于10块活组织，多了容易引起胃肠道出血，取材量受到限制，我们现在采用的方法对其进行了很大的简化，直接从新处死的胚胎动物体内获得无菌小肠粘膜组织，取材过程极容易控制量，也容易控制部位，特别方便快捷。
由于体外培养目前还没有适宜的人工合成培养基，现有的报道体外培养的小肠粘膜组织维持存活时间较短，不管是用RPMI-1640培养基（附加葡萄糖、胰岛素、谷氨酰胺和胎牛血清），还是用Trowell培养基（附加胎牛血清），细胞均最多存活24~48小时，之后就会出现退化和死亡，一般很难超过48小时，培养基中如果不加血清，时间更短，6~12小时会退化坏死，由于植块存活时间短，给实验者提供的检测时间也很短，使多项目检测不可能，只能检测那些用药之后立即就出现的反应，长期效应无法观察，使实验受到了很大限制。而在本实验中我们使用的含有GIC细胞高级培养基直接打破了现有培养基方面的限制，可以长期培养离体肠粘膜组织，可以长期在光镜下直接观察GIC对粘膜生长的影响。
本实验中，GIC对肠粘膜组织的细胞保护作用也得到了明显体现；对于培养过程中观察到的片状粘膜组织，之所以能存在很久时间，并且其内的细胞生长良好，是GIC对细胞外基质的正常代谢产生了影响，细胞外基质是维系细胞相互连接的基础。
为什么胃粘膜能够在这种环境中长期生长呢？有两个原因：一是GIC是营养丰富的细胞培养基及良好的细胞保护剂，另一个是肠道粘膜组织中有粘膜上皮干细胞，GIC启动了干细胞，使干细胞得以较长时间地生长。
对于第一个问题的解释：
GIC有效成分中含有的亚油酸是细胞必需的脂肪酸，是构成细胞生物膜不可缺少的组分，是皮肤、粘膜及深层组织损伤后进行修复的重要材料；有效成分中含有的多种氨基酸如蛋氨酸、半胱氨酸、精氨酸、亮氨酸以及多种脂类物质、维生素、微量元素，为肠粘膜细胞的生长提供了丰富的营养；有效成分还具有抗病原微生物作用，对多种细菌、病毒、真菌、原生物都有较强的抑制作用，同时具有抗炎作用；药物中的有效成分还可以促进细胞的能量代谢，蛋白质及核酸合成和生物膜转运等功能；缓慢释放，使细胞持续得到稳定的营养供应 。
GIC的抗氧化作用表现为抗自由基、稳定细胞膜。自由基是广泛存在于各种化学反应中的活泼基团，倘若其产生过量，从而引发所谓的自由基链式反应，则将导致细胞膜多不饱和脂肪酸的脂质过氧化，所产生的大量脂质过氧化物会损伤细胞膜及细胞内的大分子蛋白质与核酸，对细胞造成损伤。有效成分中维生素E的抗自由基功能是由于其自身结构具有还原性，进而捕捉自由基从而阻断自由基链式反应，起到对机体的保护作用，而其自身则经过维生素C和含硫氨基酸的再生而还原或转变为醌类化合物。大量维生素E的存在可使细胞处于流动性高、通透性严密的状态。这除了可保护膜上大量的多不饱和脂肪酸不被氧化外，还与其可以保护膜蛋白的活性结构有关。
对于第二个问题的解释：
肠道粘膜组织中有粘膜上皮干细胞，在合适条件下能够长期生长，GIC有能力启动干细胞使之活化。肠道粘膜的上皮组织来源于上皮干细胞（epithelial
stem cell）， 用 -胸腺嘧啶脱氧核苷（-TdR）标记放射自显影法观察瞬间标记后的肠腺细胞发现，上皮干细胞位于或靠近肠隐窝的部位 。为了维持动态平衡，这些干细胞不断转化为短暂繁殖细胞并向中段移动，最后要么分化为具有吸收功能的刷状缘上皮细胞，要么分化为肠道内分泌细胞。分化后的细胞最后死亡并且从肠绒毛上脱落下来并进入肠腔，任何干细胞都具有生长繁殖的能力，它们是一群分化较低的细胞，这是干细胞与分化细胞明显的不同，体外培养中最容易增殖的正常细胞是干细胞，干细胞属于未分化细胞，尽管脱离了体内生长的微环境，但仍然具有较强的增殖能力。可以断言由于GIC具有激活表皮干细胞的能力，对粘膜干细胞也应该有相应的激活能力。
至于生长的细胞的性质，我们认为一定是粘膜细胞，主要原因有两个：一是因为上皮干细胞在体外有较强的增殖功能，这已经为许多研究结果所证实，肠壁其它细胞均不具备这种能力，本实验所用的标本中，除粘膜细胞外，数量最多的应该是肠壁的平滑肌细胞，平滑肌细胞在体外可进行有限的增殖，但不能长期增殖。本实验完全可以排除平滑肌细胞生长的可能性，因为培养自始至终未曾发现形态呈条形或梭形、排列呈束状的平滑肌细胞生长。再次，目前还没有发现平滑肌干细胞，这也是平滑肌在体外不易长期生长的重要原因。其它细胞如粘膜下层疏松结缔组织中的动脉、静脉、淋巴管、神经纤维和粘膜下神经丛等组织的细胞能如此生长的可能性极小。第二个原因是优势生长的问题，当某种细胞特别容易生长的时候，其它细胞的生长就会受到一定程度的抑制或者完全被抑制，本实验中肠粘膜细胞在生长中占优势或绝对优势。
参 考 文 献
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